PstS1-ESAT-6抗原血清学和γ-干扰素释放试验辅助诊断结核病的价值

摘要：目的 分析重组融合蛋白PstS1-ESAT-6抗原血清学和γ-干扰素释放试验辅助诊断结核病的潜在价值.方法 选取40只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级BALB/c小鼠和18只SPF级豚鼠,均分别注射卡介苗(BCG)或热灭活结核分枝杆菌.选取解放军第三○九医院全军结核病研究所于2012年3-8月收治入院的129例结核病患者(结核病组)、54例非结核性肺部相关疾病患者(非结核病组)和194名健康者(健康对照组)作为研究对象.研究对象均采集外周静脉血.外周血单个核细胞(PBMC)和免疫的小鼠脾淋巴细胞经重组融合蛋白PstS1-ESAT-6体外刺激,应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测经抗原刺激后释放γ-干扰素(IFN-γ)的效应T淋巴细胞即斑点形成细胞(SFC);应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血血浆和免疫小鼠血清抗重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的IgG;应用孟都法(Mantoux)检测健康者BCG-PPD皮试、免疫豚鼠BCG-PPD皮试及重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试.结果 结核病组PBMC体外经重组融合蛋白PstS1-ESAT-6刺激,分泌IFN-γ的SFC数为(45.02±68.03)/2.5×105个PBMC,高于非结核病组的(11.87±38.63)/2.5×105个PBMC和健康对照组的(5.24±15.46)/2.5×105个PBMC (F=32.96,P=0.000).ELISPOT诊断结核病患者的敏感度为82.2％(106/129),诊断非结核病组患者和健康者的特异度分别为87.0％(47/54)和90.2％(175/194),两者特异度比较差异无统计学意义(x2=0.45,P=0.500).结核病组血浆中抗重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的IgG水平(平均A492值为0.82±0.66)高于非结核病组[平均A492值为(0.60±0.30)]和健康对照组[平均A492为(0.36±0.20)](F=43.60,P=0.000);ROC分析确定检测临界值为0.49,其用于诊断结核病的敏感度为62.2％(69/111)、诊断非结核病组的特异度为40.4％(19/47)、诊断健康者的特异度为84.5％(164/192),诊断非结核病组与健康组的特异度比较,差异有统计学意义(x2=42.60,P＜0.01).热灭活结核分枝杆菌免疫豚鼠均产生BCG-PPD和重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试反应,所有豚鼠皮肤出现红肿或硬结平均直径＞5 mm;热灭活结核分枝杆菌免疫小鼠,重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的ELISPOT和ELISA检测均为阴性.BCG免疫豚鼠只产生BCG-PPD皮试反应,硬结平均直径为(10.08±0.36) mm,不产生重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试反应;BCG免疫小鼠,重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的ELISPOT检测阴性,而ELISA检测为阳性.结论 ELISPOT用于结核病诊断优于血清学诊断,但其诊断活动性结核病价值还需进一步论证.