期刊简介
《中国防痨杂志》为专业学术类期刊。全面报道我国结核病防治的方针政策与最新的科研成果及国内外结核病控制的最新发展动态。主要栏目有专论（专稿、专访、专题），论著（结核病控制、流行病学、临床和基础），论文摘要，短篇报道，病历报告，临床病理讨论、综述、讲座、座谈会健康教育、史料资料、会议简况、防痨协会工作简报等。读者对象为从事结核病控制、临床、基础科研防痨工作者。
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首页>中国防痨杂志
- 杂志名称：中国防痨杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中国防痨协会
- 国际刊号：1000-6621
- 国内刊号：11-2761/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：维普收录(中), 哥白尼索引(波兰), 上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美), 万方收录(中)
结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达
李娟；吴雪琼；张俊仙；李香兰；张灵霞；梁建琴
关键词：分枝杆菌, 结核/抗原, CFP-10, ESAT-6, 基因表达, 免疫学
摘要：目的在大肠杆菌中高效融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6和CFP-10,获得纯化的重组ESAT6-CFP10(rCFP10-ESAT6)融合蛋白抗原.方法通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction ,PCR)扩增CFP10-ESAT6融合基因;以质粒pET-28a为表达载体,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3);以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,通过SDS-PAGE电泳和蛋白免疫印迹法 (Western blotting) 鉴定rCFP10-ESAT6在大肠杆菌中的表达,确定rCFP10-ESAT6蛋白抗原在大肠杆菌中的表达形式;采用Chelating Sepharose Fast Flow蛋白纯化试剂纯化重组蛋白.Western blotting及酶联免疫吸附试验(ELISA)分析重组蛋白的免疫原性.结果重组质粒pET28a-CFP10-ESAT6中目的基因测序结果与报道序列相同;在大肠杆菌中以可溶性形式表达;分子量约28kDa,表达量约占菌体总蛋白的46%,纯化后的rCFP10-ESAT6样品经SDS-PAGE和激光密度扫描分析表明其纯度为90%左右,每100 ml培养菌可获得16 mg左右的重组蛋白;Western印迹结果证实重组蛋白与His·tag单克隆抗体及确诊的肺结核病患者血清发生特异免疫反应.ELISA结果分析表明,该重组抗原能区分肺结核患者血清及正常人血清.结论成功地表达和纯化了结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白,该重组蛋白具有特异的免疫原性.
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